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相差顯微鏡原理以及使用方法

上傳時間:2021/4/7 來源:易買儀器網(wǎng) 點擊:

相差顯微鏡的原理

  ◎ 光波有振幅(亮度)、波長(顏色)及相位(指在某一時間上光的波動所能達到的位置)的不同。

  ◎ 當光通過物體時,如波長和振幅發(fā)生變化,人們的眼睛才能觀察到,這就是普通顯微鏡下能夠觀察到染色標本的道理。而活細胞和未經(jīng)染色的生物標本,因細胞各部微細結構的折射率和厚度略有不同,光波通過時,波長和振幅并不發(fā)生變化,僅相位有變化(相應發(fā)生的差異即相位差),而這種微小的變化,人眼是無法加以鑒別的,故在普通顯微鏡下難以觀察到。


相差顯微鏡原理以及使用教程


  ◎ 相差顯微鏡能夠改變直射光或衍射光的相位,并且利用光的衍射和干涉現(xiàn)象,把相位差變成振幅差(明暗差),同時它還吸收部分直射光線,以增大其明暗的反差。因此可用以觀察活細胞或未染色標本。

  ⊙結構特點

  ◎ 相差顯微鏡與普通顯微鏡的主要不同之處是:用環(huán)狀光闌代替可變光闌,用帶相位板的物鏡(通常標有PH的標記)代替普通物鏡,并帶有一個合軸調(diào)節(jié)用的望遠鏡。

  ◎ 環(huán)狀光闌是由大小不同的環(huán)狀孔形成的光闌,它們的直徑和孔寬是與不同的物鏡相匹配的。

  ◎ 相位板安裝在物鏡的后焦面處,相板裝有吸收光線的吸收膜和推遲相位的相位膜。它除能推遲直射光線或衍射光的相位以外,還有吸收光使亮度發(fā)生變化的作用。

  ◎ 調(diào)軸望遠鏡是用來進行合鈾調(diào)節(jié)的。相差顯微鏡在使用時,聚光鏡下面環(huán)狀光闌的中心與物鏡光軸要完全在一直線上,必需調(diào)節(jié)光闌的亮環(huán)和相板的環(huán)狀圈重合(共軛重合),才能發(fā)揮相差顯微鏡的效能。否則直射光或衍射光的光路紊亂,應被吸收的光不能吸收,該推遲相位的光波不能推遲,就失去了相差顯微鏡的作用。

相差顯微鏡

  ⊙相差附件

  ⊙使用方法

  (1)相差裝置的調(diào)換安裝

  卸下普通顯微鏡使用的聚光器,將環(huán)狀光闌裝在聚光器支架上,把綠色濾光片放在上面,它可吸收紅色和藍色光,使波長范圍小的單色光線進行照明,并有吸熱作用,能使相差觀察獲得良好的效果。再從轉(zhuǎn)換器上旋下普通物鏡,換上相差物鏡。

  (2)調(diào)焦

  打開光源,旋轉(zhuǎn)集光器轉(zhuǎn)盤,將“0”對準標示孔,使普通聚光器部分進入光路。先使用低倍相差物鏡,按普通顯微鏡操作方法進行對光和調(diào)焦。 旋轉(zhuǎn)環(huán)狀光闌,使光闌的直徑和孔寬與所使用的相差物鏡相適應,如相差物鏡為40X時應用40X標示孔的光闌。

  (3)合鈾調(diào)整

  拔出目鏡,插入合鈾望遠鏡,一邊從望遠鏡向內(nèi)觀察,并用左手固定其外筒;一邊用右手轉(zhuǎn)動望遠鏡內(nèi)筒使其上升,當對準焦點就能看到環(huán)狀光闌的亮環(huán)和相板的暗環(huán),此時可將望遠鏡固定住。再升降集光器并調(diào)節(jié)其下的螺旋使亮環(huán)的大小與暗環(huán)一致,然后左右前后調(diào)節(jié)環(huán)狀光闌聚光器上的調(diào)節(jié)鈕,使兩環(huán)完全重合。

  (4)觀察

  換回目鏡,按常規(guī)要領進行觀察。在更換不同倍率的相差物鏡時,每一次都要使用相匹配的環(huán)狀光闌。

  ⊙相差調(diào)節(jié)

  ⊙用途

  用于觀察組織培養(yǎng)中活細胞形態(tài)結構。活細胞無色透明,一般光鏡下不易分辨細胞輪廓及其結構,組織培養(yǎng)研究常用的是倒置相差顯微鏡。


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本文關鍵詞:相差顯微鏡, 上海締倫
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