光照培養(yǎng)箱多管發(fā)酵具體指哪些?下面我們就總結(jié)幾個方面供大家參考:
1.多管發(fā)酵法
初發(fā)酵實(shí)驗(yàn)發(fā)酵管內(nèi)裝有單倍或三倍乳糖蛋白胨培育液,并在內(nèi)倒置有小玻璃管。每個樣品用三個不一樣的水樣量接種,同一接種水樣量要有五管,將水樣別離接種到裝有乳糖蛋白胨培育液的發(fā)酵管中,在37℃±0.5℃下培育24h±2h。乳糖能起挑選效果,因?yàn)樵S多細(xì)菌不能發(fā)酵乳糖,而大腸菌群能發(fā)酵乳糖并產(chǎn)酸產(chǎn)氣。培育液中參加溴甲酚紫作為酸度指示劑,細(xì)菌產(chǎn)酸后,培育液即由本來的紫色變成黃色。產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管標(biāo)明實(shí)驗(yàn)陽性,如在倒管內(nèi)產(chǎn)氣不顯著,可輕拍發(fā)酵管,有小氣泡升起為陽性。
復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)細(xì)微振動初發(fā)酵實(shí)驗(yàn)陽性成果的發(fā)酵管,用3mm接種環(huán)將培育物(2-3環(huán))轉(zhuǎn)接到EC培育液中,在44.5℃±0.5℃下培育24h±2h(進(jìn)步培育溫度可構(gòu)成不利于來自自然環(huán)境的大腸菌群的成長)。培育后當(dāng)即調(diào)查,發(fā)酵管產(chǎn)氣則證實(shí)為糞大腸菌群陽性。
2.濾膜法
濾膜是一種微孔性濾膜,孔徑0.45μm。將水樣寫入已滅菌的放有濾膜的過濾器中,經(jīng)過抽濾,細(xì)菌即被截留在膜上,然后將濾膜貼于M-FC培育基上,在44.5℃±0.5℃下培育24h±2h。糞大腸菌群菌落在M-FC培育基上呈藍(lán)色或藍(lán)綠色,其他非糞大腸菌群菌完工灰色、淡黃色或無色。正常狀況下,因?yàn)闇囟群兔倒逅猁}試劑的挑選性效果,在M-FC培育基上很少見到非糞大腸菌菌落。
二.兩種辦法的注重事項(xiàng)
1.培育溫度的需求總大腸菌群中的細(xì)菌除日子在腸道中外,在自然環(huán)境中的水與土壤中也常常存在,但此等在自然環(huán)境中日子的大腸菌群培育的最合適溫度為25℃左右,如在37℃培育則仍可成長,但如將培育溫度再升高至44.5℃,則不再成長,而直接來自糞便的大腸菌群細(xì)菌,習(xí)慣于37℃左右成長,如將培育溫度升高至44.5℃仍可持續(xù)成長。因而,可用進(jìn)步培育溫度的辦法將自然環(huán)境中的大腸菌群與糞便中的大腸菌群區(qū)別,兩種辦法也都依據(jù)此理。將接種好的樣品或裝有濾膜的培育基放入光照培養(yǎng)箱時,箱內(nèi)溫度必定要到達(dá)所需求的溫度(44.5±0.5℃)時,方可放入。如用恒溫水浴箱時,其水面要高于接種物面,放濾膜的培育皿要沉到水浴箱底部。
2.加氯水樣的處置經(jīng)氯處置消毒過的水樣,水中富含必定量的余氯,使大腸菌群處于受損或受按捺狀況,在收集水樣時應(yīng)提早在采樣瓶中加硫代硫酸鈉,硫代硫酸鈉能夠脫氯,使受損的細(xì)菌得以復(fù)蘇與修正,然后避免呈現(xiàn)計(jì)數(shù)成果偏低乃至假陰性的表象。此外余氯對濾膜法培育的細(xì)菌其按捺效果尤為顯著,所以抽濾時應(yīng)對水樣進(jìn)行許多無菌水稀釋,以削減余氯的殘留。
3.樣品的保管采樣用的容器運(yùn)用前應(yīng)蓋好瓶蓋,用牛皮紙將瓶蓋和瓶頸處包裹好,置枯燥箱160℃-170℃干熱滅菌2h,或用高壓蒸汽滅菌器121℃滅菌15min。采樣后水樣的正確保管也很重要,如保管不妥可使樣品中的大腸菌群細(xì)菌或在必定條件下再成長,這些都將影響檢測成果的精確性。檢測室接到水樣后,應(yīng)當(dāng)即檢測,如因故不能檢測時,應(yīng)當(dāng)即將樣品置于冰箱內(nèi)(2℃-10℃)并于2小時內(nèi)檢測。
4.培育物質(zhì)的制備與保管
?、?多管發(fā)酵法所運(yùn)用的培育液在分裝于各發(fā)酵管中后,應(yīng)將發(fā)酵管趕快放于高壓蒸汽滅菌器中,在115℃滅菌20min(注重:這個溫度也應(yīng)操控好,既到達(dá)滅菌的效果,還要避免培育物質(zhì)分化丟失),然后儲存于冰箱或暗處備用。
?、?濾膜法所選用的M-FC培育基多運(yùn)用外購的制品,培育基中苯胺藍(lán)的純度和質(zhì)量往往影響菌落的色彩,因而,無菌包裝的成套培育基在運(yùn)用前,最棒先接種典型糞大腸菌,以調(diào)查比照菌落的色彩,來判定其穩(wěn)定性。
5.成果核算
?、?多管發(fā)酵法的成果是依據(jù)不一樣接種量的發(fā)酵管所呈現(xiàn)陽性成果的數(shù)目,從MPN表中查得相應(yīng)的MPN指數(shù),來核算每升水中糞大腸菌群細(xì)菌的MPN值。MPN是“MostProbableNumber”的縮寫,指最大能夠數(shù),它是依據(jù)核算學(xué)理論,估量水體中的菌群密度和清潔質(zhì)量的一種辦法,所以精確判別不一樣接種量發(fā)酵管的陽性數(shù)是非常重要的,不然將招致較大差錯。
?、?濾膜法的成果是計(jì)數(shù)濾膜上呈藍(lán)或藍(lán)綠色的菌落,來核算出每升水樣中的糞大腸菌群數(shù)。所認(rèn)為便于計(jì)數(shù),削減差錯,抱負(fù)的水樣體積是一片濾膜上成長20-60個糞大腸菌群菌落。
三.在實(shí)踐中的運(yùn)用討論
1.檢測辦法對樣品的適用性
?、?多管發(fā)酵法因?yàn)橹恍枨笠罁?jù)水樣的取樣量來決定將樣品培育于何種培育液中(單倍或是三倍乳糖)進(jìn)行培育,因而理論上可適用于各種水樣,但因?yàn)槭馨l(fā)酵管容積的約束,其更適合檢測水源水、地表水和污染源廢水(取樣量不大),并且若是接種的水樣量不是MPN表中的三種接種量時,還需用公式進(jìn)行換算。
⑵.濾膜法首要是選用抽濾設(shè)備將細(xì)菌截留在濾膜上,然后將濾膜貼附在固體培育基上培育,因而可用于檢測體積較大的水樣,但受濾膜孔徑的約束,在檢測混濁度高(污染源廢水)、非大腸桿菌類細(xì)菌密度大(河湖水)的水樣時,對菌落計(jì)數(shù)核算有必定影響,此外,如水樣中有毒性物質(zhì)較高,也會在濾膜上構(gòu)成累積,按捺細(xì)菌培育。
2.檢測時刻及操作進(jìn)程的繁瑣度
⑴.多管發(fā)酵法需求經(jīng)過初發(fā)酵實(shí)驗(yàn)和復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)兩個進(jìn)程后才干依據(jù)不一樣接種量的發(fā)酵管所呈現(xiàn)陽性成果的數(shù)目,從MPN表中查得相應(yīng)的MPN指數(shù),然后最終得出每升水中糞大腸菌群細(xì)菌的MPN值。能夠看出,多管發(fā)酵法的培育時刻至少需求2天以上,且對接種量、每一接種量的發(fā)酵管數(shù)都有嚴(yán)格需求(MPN表多選用9管、15管發(fā)酵管,接種量為10ml、1ml、0.1ml3種體積查詢),不然成果難以核算。
⑵.濾膜法當(dāng)前首要選用成套NPS(濾膜 培育基 培育皿)進(jìn)行細(xì)菌截留和培育,操作簡略,運(yùn)用時只需用少數(shù)無菌水潮濕培育基墊即可運(yùn)用,培育時刻1天左右,能比多管發(fā)酵法更快地取得成果,還具有高度的再現(xiàn)性和精密性。此外因?yàn)檫x用單片無菌包裝,節(jié)省了滅菌時刻,還避免操作進(jìn)程中的二次污染,并且長有菌落的濾膜片可在紫外線滅菌、枯燥后作為檢測記載永世保管,更契合計(jì)量認(rèn)證規(guī)范。
3.檢測本錢的思考
⑴.多管發(fā)酵法所用的發(fā)酵管、小玻璃倒管和塑料蓋可在清除、高壓滅菌和紫外線消毒后重復(fù)運(yùn)用,液態(tài)培育基可自行制造或選用市售已配好的歸納培育基,檢測的本錢不高。因?yàn)槠滢k法較繁瑣,當(dāng)前正有一種經(jīng)過USEPA認(rèn)證的水和廢水中糞大腸菌群檢測的規(guī)范辦法逐漸替代它,這種在美國、日本和加拿大等國家廣泛運(yùn)用的檢測技能在國內(nèi)也有必定運(yùn)用(北京市環(huán)境檢測中間、北京市排水集團(tuán)檢測中間等),這種辦法就是運(yùn)用IDEXXcolilert試劑來檢測水中糞大腸菌,盡管它是依據(jù)多管發(fā)酵法原理,不過卻將其操作大大簡化了。當(dāng)然,伴跟著操作的簡化,檢測本錢也大幅進(jìn)步,設(shè)備基本上滿是進(jìn)口的,前期投入大概在8萬元至10萬元人民幣之間,且因?yàn)椴蓸悠俊⒃噭┖兔芊庥?jì)數(shù)盤都是一次性運(yùn)用,單個樣品的檢測本錢也將到達(dá)200元人民幣左右。
⑵.濾膜法首要選用的抽濾設(shè)備(拋光不銹鋼3歧管過濾器、500ml漏斗、無油隔閡真空正壓兩用泵和手動無菌水加液器)也基本上來自于進(jìn)口,當(dāng)前許多單位運(yùn)用的都是德國賽多利斯公司出產(chǎn)的產(chǎn)物,其前期投入大概在2萬元至3萬元人民幣左右(包含100套無菌包裝的NPS,12元/每套)。因?yàn)槊總€樣品需選用3種不一樣的稀釋比進(jìn)行過濾培育,要運(yùn)用3套NPS,所以單個樣品的檢測本錢在50元人民幣左右。
四.主張
從兩者在幾個方面的比擬能夠看出,濾膜法具有省時、省料、設(shè)備需求低以及能夠收集較多的檢測水樣等長處,并且跟著應(yīng)急檢測機(jī)制的樹立,當(dāng)需求咱們對各種突發(fā)環(huán)境污染事情(病院廢水能否加氯處置、河湖能否受日子廢水污染)敏捷做出反響,更快地取得必定成果的時分,其長處越發(fā)杰出。
因而在實(shí)踐檢測工作中,咱們能夠?qū)V膜法作為首要檢測辦法,并采納辦法戰(zhàn)勝其易受水樣混濁度、其它菌種和有毒物質(zhì)攪擾的局限性,疾速反映水質(zhì)狀況,為監(jiān)督管理部門供給科學(xué)數(shù)據(jù);將多管發(fā)酵法作為輔佐辦法,經(jīng)過其來對濾膜法培育的可疑菌種進(jìn)行判定,然后使檢測成果愈加精確,只要這樣,水中的細(xì)菌學(xué)檢測才干順暢、高效的展開。
光照培養(yǎng)箱在多管發(fā)酵法注重事項(xiàng)
1.樣品的保管采樣用的容器運(yùn)用前應(yīng)蓋好瓶蓋,用牛皮紙將瓶蓋和瓶頸處包裹好,置枯燥箱160℃-170℃干熱滅菌2h,或用高壓蒸汽滅菌器121℃滅菌15min。采樣后水樣的正確保管也很重要,如保管不妥可使樣品中的大腸菌群細(xì)菌或在必定條件下再成長,這些都將影響檢測成果的精確性。檢測室接到水樣后,應(yīng)當(dāng)即檢測,如因故不能檢測時,應(yīng)當(dāng)即將樣品置于冰箱內(nèi)(2℃-10℃)并于2小時內(nèi)檢測。
2.培育溫度的需求總大腸菌群中的細(xì)菌除日子在腸道中外,在自然環(huán)境中的水與土壤中也常常存在,但此等在自然環(huán)境中日子的大腸菌群培育的最合適溫度為25℃左右,如在37℃培育則仍可成長,但如將培育溫度再升高至44.5℃,則不再成長,而直接來自糞便的大腸菌群細(xì)菌,習(xí)慣于37℃左右成長,如將培育溫度升高至44.5℃仍可持續(xù)成長。因而,可用進(jìn)步培育溫度的辦法將自然環(huán)境中的大腸菌群與糞便中的大腸菌群區(qū)別,兩種辦法也都依據(jù)此理。將接種好的樣品或裝有濾膜的培育基放入光照培養(yǎng)箱時,箱內(nèi)溫度必定要到達(dá)所需求的溫度(44.5±0.5℃)時,方可放入。如用恒溫水浴箱時,其水面要高于接種物面,放濾膜的培育皿要沉到水浴箱底部。
3.加氯水樣的處置經(jīng)氯處置消毒過的水樣,水中富含必定量的余氯,使大腸菌群處于受損或受按捺狀況,在收集水樣時應(yīng)提早在采樣瓶中加硫代硫酸鈉,硫代硫酸鈉能夠脫氯,使受損的細(xì)菌得以復(fù)蘇與修正,然后避免呈現(xiàn)計(jì)數(shù)成果偏低乃至假陰性的表象。此外余氯對濾膜法培育的細(xì)菌其按捺效果尤為顯著,所以抽濾時應(yīng)對水樣進(jìn)行許多無菌水稀釋,以削減余氯的殘留。
4.培育物質(zhì)的制備與保管
⑴.多管發(fā)酵法所運(yùn)用的培育液在分裝于各發(fā)酵管中后,應(yīng)將發(fā)酵管趕快放于高壓蒸汽滅菌器中,在115℃滅菌20min(注重:這個溫度也應(yīng)操控好,既到達(dá)滅菌的效果,還要避免培育物質(zhì)分化丟失),然后儲存于冰箱或暗處備用。
?、?濾膜法所選用的M-FC培育基多運(yùn)用外購的制品,培育基中苯胺藍(lán)的純度和質(zhì)量往往影響菌落的色彩,因而,無菌包裝的成套培育基在運(yùn)用前,最棒先接種典型糞大腸菌,以調(diào)查比照菌落的色彩,來判定其穩(wěn)定性。
5.成果核算
⑴.多管發(fā)酵法的成果是依據(jù)不一樣接種量的發(fā)酵管所呈現(xiàn)陽性成果的數(shù)目,從MPN表中查得相應(yīng)的MPN指數(shù),來核算每升水中糞大腸菌群細(xì)菌的MPN值。MPN是“MostProbableNumber”的縮寫,指最大能夠數(shù),它是依據(jù)核算學(xué)理論,估量水體中的菌群密度和清潔質(zhì)量的一種辦法,所以精確判別不一樣接種量發(fā)酵管的陽性數(shù)是非常重要的,不然將招致較大差錯。
?、?濾膜法的成果是計(jì)數(shù)濾膜上呈藍(lán)或藍(lán)綠色的菌落,來核算出每升水樣中的糞大腸菌群數(shù)。所認(rèn)為便于計(jì)數(shù),削減差錯,抱負(fù)的水樣體積是一片濾膜上成長20-60個糞大腸菌群菌落。
本文鏈接:http://m.ftqd.cn/view/651.html
本文關(guān)鍵詞:光照培養(yǎng)箱,培養(yǎng)箱